|
Materials i reactius:
Si volem fer una preparació, necessitarem un mínim de substàncies. En aquesta secció del programa tens una petita referència d'alguns productes i tècniques que pots fer servir a l'hora de realitzar les teves preparacions microscòpiques.
Instrumental:
El material mínim per fer preparacions microscòpiques es pot dividir en: material de vidre i altres eines. En el primer grup són del tot necessaris els cobreobjectes i els portaobjectes sense oblidar qualque exemplar amb excavació Un flascó netejador, provetes un cristal litzador, comptagotes ampolles opaques per guardar-hi mescles que es deteriorin amb la llum, pipetes, varetes de vidre per remoure líquids, tubs de vidre per escalfar i torçar, vidres de rellotge càpsules de petri tubs d'assaig embuts, ... En el segon apartat ens farà falta una llanceta, espàtules, agulles, una ansa de platí, pinces de diversos tipus, navalles (fulletes d'afaitar o bisturís), tisores... Per conservar el material, cal tenir unes mínimes precaucions. Els materials metàl.lics han de quedar ben nets i secs. Pel que fa als de vidre, també els hem de rentar i secar. Les tasques de neteja sïhan de fer tot seguit i no és aconsellable d'esperar l'endemà. No convé que quedin restes a l'interior dels tubs i flascons ja que, a més de ser estèticament desagradables, poden reaccionar amb altres substàncies i alterar els resultats. També és bo disposar d'un microtom de mà, un encenedor d'alcohol, una balança de precisió i un aparell centrifugador.
Reactius:
Per tal de millorar l'observació i fer-la més duradora, caldrà emprar unes substàncies que ens permetran modificar les característiques del materials. Els fixadors maten les cèl.lules i les deixen en condicions de tenyir-les i muntar-les. Una bona tenyida ens pot fer destacar elements cel.lulars que d'altra manera no es veurien. Finalment és convenient tenir una col.lecció de preparacions que, guardades dins d'una capsa, puguin ser observades en qualsevol moment. Per evitar que el temps les faci malbé, cal fer amb molta cura la fase del muntatge. Ja des del primer moment convé tenir algunes substàncies imprescindibles al nostre laboratori i que detallarem als apartats de fixació, colorants i muntatge.
Els fixadors:
Normalment la fixació de materials consisteix a matar la cèl.lula de tal manera que se'n conservin les estructures. Un bon fixador ha de mantenir inalterades les estructures protoplasmàtiques i, per tal que això passi, cal que penetri amb rapidesa. Els fixadors són substàncies que podem trobar fàcilment. L'alcohol i el formol són bons fixadors. Deshidraten el material al mateix temps que fan insolubles les prote‹nes. També molt utilitzats són l'àcid acètic i les sals de crom (dicromat potàssic). Per tal de fer més efectius els fixadors, es fan barreges d'aquestes substàncies. Així podem trobar fixadors que consisteixen en mescles d'alcohol, àcid acètic, formol i altres.
Els colorants:
La tenyida és a vegades necessària per tal de fer més evidents estructures que no es podrien veure o que es veurien amb molta dificultat. Si el material està format per cèl.lules vives caldrà emprar uns colorants que no n'afectin massa el metabolisme; es tracta dels colorants vitals, un bon exemple dels quals seria el vermell neutre que tenyeix els nuclis de les cèl.lules. Si els materials estan fixats, podem fer diversos tipus de tenyides ressaltant amb un el nucli (colorant nuclear) i amb un altre el citoplasma, o bé utilitzar un colorant que tenyeixi la cèl.lula en conjunt. Per fer ressaltar estructures anatòmiques es pot fer servir un colorant àcid. Per exemple el vermell Congo També es pot fer amb l'eosina i un colorant bàsic, amb el verd de metil o el blau de metilè. Algunes substàncies que formen les cèl.lules es tenyeixen amb substàncies molt concretes. Així per exemple la lignina es pot tenyir de vermell si l'amaram prèviament en àcid clorhídric i després li aplicam fluoroglucina. s conegut de tothom la tenyida blavosa dels grans de midó quan els posam en contacte amb una solució de iode
El muntatge:
Per conservar durant llarg temps els materials preparats caldrà realitzar un muntatge incloent-los en substàncies que evitin que es deteriorin. Una manera senzilla és la inclusió en gelatina glicerinada. Aquesta tècnica consisteix a macerar els materials bé en lactofenol o en líquids glicerinats. Fondrem una petita gota de gelatina glicerinada sobre el portaobjectes. Convé que el portaobjectes estigui escalfat prèviament per evitar que la gota es refredi i se solidifiqui. Després introduirem el material al centre de la gota evitant que es formin bombolles, per acabar tapant amb el cobreobjectes. Passats uns dies podem segellar la preparació amb un vernís o resina. Un altre mètode és el muntatge en resina. Com que la resina no es dissol amb l'aigua caldrà deshidratar abans els materials. Utilitzarem alcohols de diverses concentracions augmentant gradualment fins a l'alcohol absolut. Ara hem d'introduir les mostres en un oli al més transparent possible (cedre, lavanda...) A partir d'aquí el mètode a seguir és semblant al descrit per a la gelatina glicerinada. (Resulta bastant més difícil que l'anterior). El millor dels mètodes pel que fa a la netedat i transparència de les preparacions és el del bàlsam de Canadà. Es tracta també d'una resina que es ven dissolta en xilol. L'objecte es macera prèviament en xilol. Una vegada ben macerat deixarem una gota de bàlsam al centre d'un portaobjectes. Amb molt de compte, introduirem la mostra i taparem amb el cobreobjectes, sempre evitant que es formin bombolles. En els tres casos convé deixar la preparació almenys un dia en posició horitzontal. Una petita pressió realitzada per un pes ens pot ajudar a uniformar la gruixa de la mostra evitant que la resina s'acumuli a un cantó.
Les fórmules:
Solució fisiològica Lactofenol Clorfenol Líquid de Bouin Hematoxilina Hemalum de Mayer Hematoxilina fèrrica Fucsina bàsica Violeta de genciana Tioina fenicada Blau de metilè fenicat Mètode Gram Fucsina fenicada Colorant de Giemsa Líquid coureacètic Glicerina fenicada Hematoxilina de Erlich Líquid de Fleming Safranina Líquid de Fehling Reactiu Millon Mètode Gray Líquid de Certes Líquid narcotizant de Beauchamp Alcohol sublimat Líquid de Hayem Solució Lemberg Solució Iodeiodurade Reactiu de Herzberg
|
|